Alapaktivitását az SP6 Promoter

In vitro kísérletek azok kívül végzett egy élő szervezet egy kémcsőben vagy hasonló környezetben. A tudósok is, hogy az RNS másolatok vagy átiratát egy gén in vitro a folyamatot nevezzük in vitro transzkripció . Az enzim , ami az RNS- transzkriptum alapján nevezzük a gén egy RNS -polimeráz . Az egyik ilyen molekula az SP6 polimeráz . Szükség van egy DNS-szakaszt úgynevezett SP6 promoter annak érdekében , hogy megfelelően működjön . Promoterek

A promoter a DNS-régiót köti egy RNS -polimeráz , hogy kezdeményezzen a transzkripciót. Az SP6 polimeráz megköveteli, hogy egy nagyon specifikus szekvencia jelen lehet a promoter ahhoz kötődni , így amikor az SP6 polimeráz használják az in vitro transzkripció , a gén tartalmaznia kell az SP6 promoter transzkripció lezajlását . Az SP6 polimeráz származik egyfajta vírus úgynevezett bakteriofág; biotechnológiai cégek termelni ezt polimeráz fertőztek szalmonella baktériumok fág majd elszigetelése a polimeráz .
Expression

Basal kifejezés vagy tevékenység utal arra a szintre véleménynyilvánítás hiányában más molekulák , amelyek növelik vagy csökkentik a transzkripciós szinten. Aktivátorok vagy represszorok , például olyan fehérjék, amelyek képesek kötődni a promoter vagy más gén szabályozó régiók , és vagy segítik felvételével az RNS -polimeráz , vagy megakadályozzák, hogy kötelező érvényű. Induktorok molekulák, amelyek a termelés növelése , a gén termék emelésével expressziós szintje .
SP6

alapaktivitást az SP6 promoter függ feltételeiről szóló a kísérlet . A legfontosabb szempont , persze, hogyan kísérleti körülmények befolyásolhatják aktivitását , és hogyan SP6 viszonyul más rendszerekkel. Általában SP6 polimeráz és támogatói szállít alacsonyabb hatékonyság , mint a T7 vagy T3 in vitro transzkripció rendszerekben , de ideális körülmények között SP6 nagyjából hasonló a fent említett két másik . Mint SP6 , T7 és T3 egyaránt használni egy RNS- polimeráz- bakteriofágból származó .
Feltételei

só koncentrációját és a hőmérsékletet két fontos tényező a meghatározó bazális aktivitást. SP6 nagyon érzékeny a sókoncentráció , így nagyobb sókoncentráció csökkenti annak aktivitását jelentősen. Minden más változatlan marad , a kifejezés jóval nagyobb a 104 fok Fahrenheit , mint 99 fok . Nukleotid koncentráció másik fontos szempont . Alacsony koncentrációban potenciálisan veszélyezteti a transzkripció megszüntetni idő előtt , és ezáltal csökkenti a hatékonyságot . Növelése nukleotid koncentráció elkerülni ezt a problémát . Ha szintetizáló RNS-próbák , de ha túl sokat jelöletlen nukleotid akkor csökkentheti a jelölt nukleotid a végtermékben .