Hogyan készüljünk egy függő csepp

meghatározásához 3D szerkezet egy fehérje , először kell egy tiszta kristály is . A függő -drop módszer egy csepp protein - tartalmú oldatot lóg egy fedőlemez . Ez alatt függő csepp fekszik a tartály nagyobb sókoncentráció , mint a csepp. Idővel , vízgőz elhagyja a csepp, és végül a tározó , így a fehérje kikristályosodni. Minden protein igényel különböző körülmények között ( például a só koncentráció és pH) , és gyakran próba-és hiba található az egyetlen módja, hogy megtalálják a megfelelő conditions.Things amire szüksége van
Lab kabátot, kesztyűt és védőszemüveget
mikropipetta pipetta tippeket
1 mólos nátrium- klorid 0,05 mólos acetát puffer , pH = 4,7
2 ml -es Eppendorf- csövek ( vagy hasonló ) photo Centrifuga
24 - lyukú lemezen
Vákuum zsírral
fecskendőben szilikonos fedőlemez
Sűrített levegő
csipesz
Clay (pl gyurma vagy hasonló )
50 mg /ml lizozim 0,05 mólos acetát puffer oldat pH 4,7
Show More utasítások

1

Tedd labor felszerelés ( kabátot, kesztyűt és védőszemüveget ) .
2

mikropipettával hozzá 1,1 ml nátrium-klorid (só) és acetát puffer oldatot egy Eppendorf-csőbe .
3

centrifugáljuk a lezárt Eppendorf csövet a sóoldat benne körülbelül öt percig 13000 rpm . Ne feledje, hogy egyensúlyt a centrifuga azáltal másik Eppendorf csőbe, amely 1,1 ml vizet szemben , és ellentétes a sóoldat cső .
4

hozzá 1 ml sóoldat egy jól egy 24 -lyukú lemez .
5

Használjon zsírral töltött fecskendőt , hogy tegyen egy vékony réteg zsír pereme körül ezt is. Vigyázzon, hogy ne adjunk túl kevés vagy túl sok. Ha hozzá túl sok zsír , a zsír fog futni le a kútba , és esetleg tönkreteheti a kísérlet . Ha túl kicsi , az is nem légmentesen , és a kísérlet nem fog működni . Célja csak annyi zsír , hogy a fedőlemez és zsír alkotnak légmentes később .
6

Roll az agyagot a kezét, hogy négy kis golyókat , és nyomja őket a négy sarkából a 24 lyukú lemezre . Ők járnak támogatja , hogy biztosítsák a fedelet a lemez nem kerül érintkezésbe a fedőlemez .
7

A sűrített levegőt fújja a port le a fedőlemez . Tartsa a fedőlemez egy pár tiszta csipesszel .
8

Kapd fel 4 mikroliter a lizozim oldatot a mikropipetta , és hozzá ez a megoldás , hogy a központ a fedőlemez . Módosítása pipetta tippeket, és adjunk hozzá 4 mikroliter sóoldat . Gyengéden pipettázzon fel és le , szopás a folyadék , majd kiutasították az , hogy keverjük a sóoldat a lizozim oldatot . Ügyeljen arra, hogy keverje a két nem diszpergáló a folyadék az egész fedőlemez .
9

Fordítsa a fedőlemez alatt gyorsan, így a folyadék nem csúszik ki , és növény négyszögoldali tetején is. Ügyeljen arra, hogy nyomja meg finoman úgy képez légzáró tömítést a zsír körül a szélei is.
10

Nyomja meg a burkolat a 24 - lyukú lemezen rá az agyag golyók , és hagyja a lemez , hűvös helyen .