Hogyan csökkentse a nem- specifikus kötés tároló

Egy Immunoassay a kötési kapacitást egy tartályba vagy lyukakat magasabb, mint a fehérje mennyiségét helyezzük a tartályt vagy a kutak. Ha csökkenteni vagy megakadályozni antitestek vagy más típusú molekulák és fehérjék , hogy elnyeli a tartályt vagy kutak, a vizsgálatot meg kell mosni a megfelelő pufferben és egy specifikus blokkoló reagenst kell hozzáadni. A típus a puffer és a blokkoló reagens kiválasztott típusától függ a kísérleti assay.Things amire szüksége van
Plate kutak
Tompítóoldat
Blokkoló reagens
pipetta
Antigen
antitest

megjelenítése MoreInstructions
1

Kabát a lemezt kutak az antigénnel . Használjon antigén hígítás . Tiszta oldatokat antigén nem szükséges , mivel csak mintegy 3 százalék a fehérje a mintában a cél- fehérje. Amikor hígításával , biztosítják, hogy a minták tartalmaznak az antigént olyan koncentrációban, amely belül van az érzékelési tartománya az antitestet. Pipettázzuk antigén hígító megoldás le a lemezt kutak . Egyes lemezeket elő lehet bevonva antigénnel. Olvassa el az utasításokat mellékelt lemez kutak .
2

Fedjük le a lemezeket ragasztó , műanyag és inkubáljuk egy éjszakán át. Mossuk a lemezeket pufferrel oldatok, mint például a trisz- pufferolt sóoldat vagy foszfát - pufferolt sóoldatban. Mosni , öblítse le a lemezeken megszorította üveg tele a puffer megoldás egy laboratóriumi mosogató. Pat a lemezeket egy papírtörlővel , hogy eltávolítsa a maradék csepp puffer- oldatban.
3

csökkentse a nem specifikus proteinek kötődését és molekulák használatával blokkoló puffert vagy reagens , például egy detergens blokkoló , száraz tej vagy szarvasmarha szérum . A típus a blokkoló reagens használt függ a vizsgálatban. Add a blokkoló reagens a kutak egy pipetta . Fedjük le a lemezt ismét ragasztó műanyag és inkubáljuk egy éjszakán át.
4

ismét mossuk a lemezt kutak újra a puffer megoldást. Ezek a lépések csökkentheti a nem- specifikus kötődés , hogy előfordulhat , hogy a lemez tartályaiba hozzáadása előtt a szükséges ellenanyag oldatot az eljárást. Ezen túlmenően, a blokkoló reagens segíthet csökkenteni háttér színek az eredményeket a vizsgálatok .