Hogyan számoljuk antitest koncentráció

Az egyik leggyakoribb módja a kiszámítása protein koncentráció laboratóriumi környezetben , hogy egy Bradford . A Bradford -reagens kolorimetriás reagens , amely megváltoztatja a színét, fehérjéken alapuló koncentráció . Kombinálásával ismert standard görbe a Bradford reagens , akkor létrehozhat egy intézkedés, amely ellen lehet számítani a koncentrációját minden fehérje , beleértve antibodies.Things amire szüksége van
tisztított antitest ismert puffer
Buffer illő felfüggesztése ellenanyag
liofilizált szarvasmarha szérum albumin ( BSA ) photo Microcentrifge csövek
Laboratory toll
Vortexeren
Laboratory skála
súlyú papír
1 ml pipetta
Bradford reagens
Multi -well plate
Colorimetric leolvasó
Microsoft Excel
Lab könyv
Pen
Show More utasítások
létrehozni Általános
1

Intézkedés 200 mg BSA mérlegelését papírra laboratóriumi méretekben. Mellékelje azt egy mikrocentrifuga csőbe. Adjunk hozzá 2 ml puffer a mikrocentrifuga csövet tartalmazó 200 mg BSA-t . Címke ez a cső " 1 " : Matton 2

Vortex csövek 1 , míg a BSA teljesen fel nem oldódik .
3

Remove 500 ul a BSA pufferben és átadása azt , hogy egy második csőbe. Címke ez a cső "2" Add hozzá 500 ul sima puffer cső 2 : Matton 4

Remove 200 ul a BSA puffert cső 1. és át egy új csőbe . Címke ez a cső " 3 " Adjunk hozzá 800 ul sima puffer cső 3 : Matton 5

Remove 100 ul a BSA puffert cső 1. és át egy új csőbe . Címke ez a cső " 4 " Add hozzá 900 ul sima puffer cső 4 : Matton 6

Eltávolítás 10 ul a BSA puffert cső 1. és át egy új csőbe . Címke ez a cső " 5 " Add hozzá 990 ul sima puffer Cső 5. Tubes 1 5 tartalmaz egy fokozatos szabvány sorozat. Az első cső van egy ismert koncentráció 100 mg /ml-t; A második , 50 mg /ml; A harmadik , 20 mg /ml-es , a negyedik , 10 mg /ml; és az ötödik , 1 mg /ml legyen. Minden cső körülbelül 1 ml oldatban.
Létrehozása antitest Cseppek : Matton 7

Adjunk hozzá 5 0ul tisztított antitest 95 0ul puffer . Címke ez a cső " A. "
8

Add 10 ul tisztított antitest 990 ul puffer . Címke ez a cső " B " : Matton 9

Add 2 ul tisztított antitest 998 ul puffer . Címke ez a cső a "C"
Helyezze a lemezt
10

Hirdetés 0,5 ml sima puffer az első kutak két oszlopban a többlyukas lemez .

11 <​​p> Hirdetés 0,5 ml tartalmának cső 1 A második kút az első két oszlopa az soklyukú lemez . Folytassa le a -sorozatban , míg az első két oszlopban tartalmaz 0,5 ml egy BSA standard oldatot minden egyes Tubes 1-5 , ideértve a kutakat a sima puffer .
12

0,5 ml Bradford reagenst minden is. Örvény a lemezt keverni a reagens a fehérjetartalmú oldatok , vigyázva, hogy ne öntse ki a tartalmát bármelyik kutak . Várjon 5 percet .
13

Olvassa el a lemez protokoll szerint kifejezetten a leolvasó hullámhosszon 595 nm .
Számolja antitest koncentráció

14

Másolás a leolvasott értékeket a leolvasó a Microsoft Excel .
15

Hozzon létre egy grafikont a két oszlop értékek képviselő BSA szabvány használatával Chart Wizard a Microsoft Excel .

16

plot pontokat mért ellenanyag hígítást az Excel grafikon . Olvassa el a megfelelő koncentrációjú fehérje értéke szerint az Y-tengely az ellenanyag hígítás pont az Excel grafikon .
17

Attól függően, hogy használ a kapott értékek cső A , B vagy C , szorozza meg az értéket akár 20, 40 vagy 500 , ill. Az így kapott érték a koncentráció a tisztított antitest .