Hogyan találjuk meg a pH- citoplazma

Lehetséges, hogy a hidrogén- , vagy pH , olyan intézkedés a savasság vagy lúgosság folyékony . Fontos, számos területen , többek között a biológia , a kémia és a környezeti tudomány. Mérési pH egyszerű a legtöbb helyzetben. Lakmusz papír lehet illeszteni a folyadék , és a változás a papír színe azonosítja a mértéke, hogy a folyadék savat vagy bázist. Azokban az esetekben , amikor a vizsgálandó folyadék a cellán belül , más módszereket kell legyen ahhoz, amire szüksége van devised.Things
2 ', 7' -bisz - (2 = karboxi-etil) -5 (és -6 ) - karboxi ( BCECF ) vagy más anyagot, amelyet a változó fluoreszcencia eltérő pH körülmények
fluoreszcens spektrofotométer monokromátorok dupla , vagy hasonló eszköz fluoreszcencia mérésére
Centrifugáljuk
Előre meghatározott kalibrációs görbék mérésére korrelációja intracelluláris BCECF és a citoplazmatikus pH

Show More utasítások
1

Cool hőmérséklete a sejt minta 41-50 fok . Ez lehetővé teszi a jobb felszívódás mértéke a fluoreszkáló anyag által a sejtek . Matton 2

betölteni a sejt fluoreszcens mintát egy indukáló anyag, mint például a BCECF . Ezt úgy tehetjük meg , hogy hozzáadjuk a BCECF a sejt közepes , majd keverjük az elegyet 2,5 órán át óvatosan . A BCECF szívódik áteresztő membránon keresztül a sejtek.
3

szét a sejteket a közép-és fel nem szívódott BCECF futtatásával a mintát át centrifugáljuk. Tegye a sejtek egy külön tartályba. 4 Matton

Melegítsük fel a sejt minta 98,6 fok 30 percig , hogy közelítse a feltételeket, az emberi szervezetben . Ha a vizsgálat alatt álló sejtek normálisan élni néhány más környezetben , mint az emberi test , állítsa be a minta a megfelelő hőmérsékletet.
5

Excite a sejt minta keveréssel. Ez segít növelni a fluoreszcens aktivitást. Matton 6

Mérjük fluoreszcens intenzitását a sejt minta a spektrofotométer segítségével . A legjobb eredmény elérése érdekében a gerjesztő fény hullámhossza 500-510 nm. Ezeken a hullámhosszak , van egy nagyobb intenzitású fluoreszcens terjedését , így könnyebb megkülönböztetni az eredményeket. A fluoreszcens intenzitását mérjük a relatív fluoreszcens egységeket ( RFU ) , az arány a fényerő az anyag gerjesztett , fluoreszkáló állapotából a normális, unexcited állapotban. Minél nagyobb a RFU , annál világosabb az anyag , összehasonlítva a normál állapotba .
7

összehasonlítása spektrofotométer eredményeket előre megrajzolt kalibrációs görbék . Általánosságban , a magasabb pH-érték azt jelenti, nagyobb fluoreszcens a mintán belül . A gerjesztési hullámhossz 510 nm-en , olyan anyag, amelynek pH-ja 6,4 mutatna RFU körülbelül 20 , míg az olyan anyag , amelynek kémhatása pH 9,9 mutatna RFU körülbelül 55 .